Resumo: Marcadores moleculares compõem uma classe de biomarcadores com importância crescente no diagnóstico e prognóstico de doenças, no monitoramento de terapias, na busca de novos medicamentos, e no entendimento de processos básicos da biologia. Tais marcadores incluem proteínas/peptídeos, lipídeos, carboidratos e ácidos nucléicos. Várias classes de ácidos nucléicos têm sido descritas, todas com seu papel como marcadores moleculares; mais recentemente, ácidos nucléicos circulares - RNA circular (circRNA) e DNA extra-cromossômico circular (eccDNA) são novas espécies de ácidos nucléicos que têm sido investigados em vários contextos, inclusive como biomarcadores moleculares para processos biológicos e doenças tais como câncer. Uma área de biologia e saúde com alta relevância para doenças degenerativas é a diferenciação celular. Esse processo natural tem alta relevância para o desenvolvimento de tecidos, e para doenças degenerativas associadas ao envelhecimento, tais como osteoartrite. A diferenciação condrogênica é um processo bem caracterizado em termos de expressão de proteínas e construção do tecido de cartilagem. Porém, o nível de conhecimento sobre circRNA, e especialmente, sobre eccDNA, neste contexto está relativamente ausente. Neste sentido, a presente proposta tem objetivo principal de investigar o potencial de ácidos nucléicos circulares como biomarcadores de diferenciação condrogênica. Para isso, células-tronco humanas serão induzidas à condrogênese, e os componentes de ácidos nucléicos circulares serão caracterizados tanto nas células, quanto nas vesículas extracelulares liberadas pelas células ao longo do processo de diferenciação. Um grupo de ácidos nucléicos circulares mais diferencialmente expressos será testado pela sua capacidade de alterar a eficiência da diferenciação. A proposta ainda propõem o uso de métodos inovativos de detecção de ácidos nucléicos circulares, específicamente: (i) O sistema de CRISPR-Cas12; (ii) Nanopartículas triangulares de prata; e (iii) Quantum dots. Os dados gerados terão benefício em termos de propor potenciais novos biomarcadores para osteoartrite, bem como potenciais moléculas terapêuticas; e para comparar perfis moleculares entre células induzidas à condrogênese por diferentes mecanismos. |